细胞染色最新视觉报道_细胞染色方法有几种(2024年11月全程跟踪)
线粒体膜电位检测实验全攻略 线粒体是细胞中非常重要的细胞器,它们负责生成ATP,促进能量转换,还参与细胞凋亡。线粒体在呼吸过程中会产生一种电化学势能,这种势能储存在线粒体内膜上,形成线粒体膜电位(MMP)。正常的MMP是细胞正常生理功能的基础。 实验流程: 1. 细胞染色 悬浮细胞 细胞铺板:在6孔板中,每孔用1mL培养基重悬100万细胞。根据细胞类型选择合适的密度进行铺板。 设置阳性对照:用CCCP处理细胞,然后在细胞培养箱中37℃孵育5分钟。 JC-1染色:加入适量JC-1,在细胞培养箱中37℃孵育15分钟。 离心:孵育结束后,400g 4℃离心3~4分钟,弃上清。 洗涤:用1㗐BS洗涤2次,400g 4℃离心3~4分钟。 结果检测:用500的PBS重悬细胞,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分光光度计或流式细胞仪分析(绿色荧光:Ex/Em=510/527nm;红色荧光:Ex/Em=585/590nm)。 贴壁细胞 若用荧光分光光度计或流式细胞仪检测贴壁细胞,可先对贴壁细胞进行消化、收集,重悬后参考悬浮细胞的检测方法。若用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜检测:直接参考悬浮细胞实验步骤方法即可。 注意事项: CCCP是一种线粒体电子传递链抑制剂,对人体有害,实验过程中一定要穿实验服并戴一次性手套操作,注意小心防护。 JC-1是光敏感性的,所有染色步骤的操作过程中避免强光接触;未用完的储存液,避光保存,并避免反复冻融。 JC-1染色完成后,应立即进行后续的结果分析,以减少各种可能的误差。 通过这些步骤,你可以轻松检测线粒体膜电位,了解细胞能量转换的情况。
细胞染色全攻略:从零开始到实验结果 细胞染色其实并不复杂,只要按照步骤来,你也能轻松搞定。今天我就来分享一下我们在实验室常用的细胞染色方法和操作步骤,希望对大家有帮助。 准备工作 ꊩ斥 ,你需要消化并收集细胞,然后以2-10㗱0Ⳡcell/coverslip的密度接种到24孔板中。滴加50-100的细胞悬液,2小时后补加500的10%FBS+DMEM。 培养细胞 𑊥4孔板放入37℃的细胞培养箱中培养48小时,然后用显微镜观察。选择细胞状态和数量都合适的玻片进行染色。 固定细胞 犥旧的培养液,用冰冷的PBS洗两次。然后加入0.5ml的3.7-4%甲醛(在PBS中),室温固定10分钟。 穿膜处理 再用PBS洗两次,加入0.5ml的穿膜液(0.1% triton X-100 + 0.1M Gycine),冰上放置30分钟。 封闭非特异性结合 再次用PBS洗两次,加入0.3ml的5mg/ml BSA,室温封闭1小时。 一抗孵育 𐊧萂S洗两次,取一张封口膜,标记好,加入25的一抗(用5mg/ml BSA稀释1:50-100)。将盖玻片细胞面朝下反扣在一抗液滴上,放在湿盒中室温孵育1-3小时。然后小心夹起盖玻片,细胞面朝上放入原来的24孔板中,再用PBS洗两次。 二抗孵育 取另一张封口膜,标记好,加入25的二抗(羊抗兔罗丹明,用5mg/ml BSA稀释1:50-100)。将盖玻片细胞面朝下反扣在二抗液滴上,放在湿盒中室温黑暗中孵育1-3小时。 DAPI染色 用PBS洗两次,将玻片与10的DAPI(1ⵧ/ml in PBS,贮存液:1mg/ml in dd H2O)室温孵育1-5分钟。 封片与观察 슧萂S洗三次,擦干玻片背面的水分,封片于载玻片上,标记好(时间、细胞名称、实验内容、号码)。待封片胶干后,可以在荧光显微镜下观察。观察时注意记录每张玻片的内容,以免混淆。观察完后将玻片放-20℃保存。 简化操作 ⚡ 如果你只观察转染了EYFP的荧光蛋白,不需要给内源蛋白染色,可以直接用DAPI染核后封片。为了保证实验的重复性,每次最好做平行2组以上。 对照组设置 ꊤSA (5mg/ml)代替一抗,二抗照加为染色的对照组,做法同上。 希望这些步骤能帮到你,让你的细胞染色实验更加顺利!如果有任何问题,欢迎留言讨论哦!
细胞生物学期末复习重点整理 细胞生物学笔记 细胞生物学复习 细胞生物学丁明孝 十二五”普通高等教育本科国家级规划教材《细胞生物学》(第5版) 主编:丁明孝、王喜忠、张传茂、陈建国 复习重点整理: 叶绿体的主要功能:光合作用的全过程 光合作用的过程分为三大步骤: 原初反应:光合色素分子从被光激发至引起第一个光化学反应为止,包括光能的吸收、传递、转换。 电子传递与光合磷酸化:电子在电子传递体之间的传递和光合磷酸化,形成ATP和NADPH,即将电能转化为活跃的化学能。 碳同化:将光反应所产生的ATP和NADPH中的活跃化学能转换为储存在糖类中稳定的化学能的过程。 MPF在细胞周期调控中的作用 发现:细胞融合与PCC实验结论,爪蟾卵子成熟过程。 结构组成:MPF是一种使多种底物蛋白磷酸化的蛋白激酶,由M期Cyclin-CDK形成的复合物。 活化:随Cyclin浓度变化而变化,激酶与磷酸酶的调节,活化的MPF可使更多的MPF活化。 功能:启动细胞从G2期进入M期的相关事件,包括核膜的破裂、染色质的凝集、有丝分裂纺锤体的形成、诱导靶蛋白的降解。 胞外信号分子诱导的caspase依赖性细胞调亡的分子机制 当细胞接受凋亡信号分子(Fas,TNF等)后,凋亡细胞表面信号分子受体相互聚集并与细胞内的衔接蛋白结合,这些衔接蛋白又募集procaspase聚集在受体部位,procaspase相互活化并产生级联反应使细胞凋亡。 下游caspase活化后作用于靶细胞:作用于底物,裂解核纤层蛋白,导致细胞核形成凋亡小体;裂解DNase结合蛋白,使DNase释放并活化,降解DNA形成DNA ladder;裂解参与细胞连接或附着的骨架和其他蛋白,使凋亡细胞皱缩、脱落,便于细胞吞噬;导致膜脂PS重排,便于吞噬细胞识别并吞噬。 通过这些复习重点,希望能够帮助你更好地掌握细胞生物学的关键知识!
细胞培养与免疫荧光染色全攻略 一、细胞接种 슥覗 菌条件下,打开Slide I biTreat的包装,并将其放在Slide滑架上。 使用移液枪向通道中加入100 3㗱0^5 cells/mL Rat1细胞悬液。 用提供的盖子轻轻盖住储液池,但不要完全密闭。 将滑架放入培养箱中培养(37℃;5% CO2)60分钟,使细胞贴壁。然后向两个储液池中每池加入0.5 mL的无细胞培养基。 孵育过夜。 二、细胞固定 犤觧ꥐ𘥎覶 中的全部培养基。 用1 mL杜氏磷酸盐缓冲液缓慢加入一个空储液池中,并从另一个储液池中吸出,不要一次性吸去整个通道中的液体。 用同样的方法加入约200 的3.7%多聚甲醛(用磷酸盐缓冲液配制)以固定细胞。从通道的另一侧吸去储液池中的内容物,等待10分钟。 三、破膜与封闭 按照步骤5所述,用1 mL磷酸盐缓冲液再次洗涤细胞。 用约200 0.1% Triton X-100破膜液(用磷酸盐缓冲液配制)处理细胞3-5分钟。 用磷酸盐缓冲液洗涤细胞。 用约200 1% BSA封闭液(用磷酸盐缓冲液配制)处理细胞20分钟。 用适量磷酸盐缓冲液洗涤细胞。 四、染色与封片 芥𘥎道中的所有液体,不要使通道干燥。 使用100 Alexa Fluor 488鬼笔环肽(1 U鬼笔环肽+ 500 磷酸盐缓冲液+1% BSA封闭液,购自Invitrogen公司)并在室温下培养20分钟。 用磷酸盐缓冲液洗涤细胞并清空通道。 使用100 DAPI(0.1 /mL,购自Sigma-Aldrich公司)染色3-5分钟。 用磷酸盐缓冲液洗涤细胞,并去除所有液体。使用滴管瓶在储液池中注入100 ibidi封片剂。用随附的盖子密闭储液池。 在荧光显微镜下用适当的滤光片组观察细胞。
流式实验对照选择指南:让你轻松搞定圈门! 在进行流式染色实验时,你是否困惑于选择哪种对照来帮助你设置圈门? 今天,我们来详细解析流式实验中如何选择合适的对照,希望能为你的实验提供一些参考和帮助! 选择合适的对照至关重要,因为它们将直接影响你的实验结果。以下是几种常见的对照类型: 空白对照:使用未染色的细胞或背景荧光作为对照,帮助你识别阳性信号。 同型对照:选择与目标抗体相同亚型的抗体作为对照,以排除非特异性结合。 FMO对照:使用荧光微球(Fluorescent Microspheres)作为对照,帮助你识别荧光溢出。 ᠩ择合适的对照不仅能提高实验的准确性,还能确保你的数据可靠。记住,正确的对照选择是流式实验成功的关键! 希望这些建议能帮助你顺利完成流式细胞术实验,获得准确、可靠的结果!
植物细胞玻片标本制作全攻略 褽🧔襅学显微镜观察植物细胞时,制作玻片标本是关键。为了让可见光能够穿过细胞,材料必须薄而透明。以下是制作植物细胞玻片标本的详细步骤: 常用的玻片标本类型: 切片:从生物体材料上切取的薄片制成。 涂片:将液体的生物材料涂抹在载玻片上制成。 装片:用撕下或挑取的少量生物材料制成。 𑠥𖤽植物细胞临时装片的步骤: 准备材料:选择新鲜的植物叶片,用刀片切成薄片。 固定细胞:将薄片放在载玻片上,用盖玻片轻轻压住,确保细胞固定。 染色处理:根据需要,可以用染料对细胞进行染色,使其更易观察。 观察细胞:将载玻片放入显微镜,调节焦距,观察细胞结构。 🠧𛆨结构与功能: 细胞壁:保护和支持细胞的作用。 液泡:溶解多种物质,保持细胞内环境稳定。 线粒体:为细胞的生命活动提供能量。 通过这些步骤,我们可以更好地理解植物细胞的结构和功能,进一步探索生命的奥秘。
油红O染色:揭秘脂质的世界 油红O染色,听起来有点拗口,但它的原理其实非常直观。简单来说,油红O染料对脂质有特别的亲和力。这种染料是可溶的,能够轻松渗透细胞膜,并与细胞内的脂质滴结合。因为油红O对脂质的这种特异性结合,使得含有脂质的区域在光学显微镜下呈现出迷人的红色,而其他区域则保持原色或呈现不同的颜色。这样一来,我们就能在显微镜下清晰地看到脂质的存在了。 想象一下,脂肪组织切片在油红O染色后,脂肪滴被染成了红色,而周围的组织则呈现出蓝色。这种鲜明的对比,让我们能够直观地检测到脂质的存在。是不是很神奇? 总之,油红O染色是一种非常实用的技术,它不仅能让我们看到细胞内的脂质,还能帮助我们研究脂质的分布和代谢。无论是科研还是教学,这都是一个非常有用的工具。
如何测定铵盐中的氮含量 中的氮含量是化学实验中的一项重要任务,通过这个实验,我们可以了解铵盐的氮含量,从而更好地理解铵盐的性质和用途。以下是具体的实验步骤: 稀释病毒 首先,将病毒稀释到不同的倍数,例如10-1到10-6。这一步非常关键,因为不同浓度的病毒会影响实验结果。 设置6孔板 ꊠ 在6孔板中设置不同的组别,然后吸取适量的病毒液和培养液加入每个孔中,每孔大约1到2毫升。 孵育病毒 将6孔板放入37℃的培养箱中,孵育2小时,每15到20分钟轻轻摇匀一次,以确保病毒与细胞充分接触。 准备琼脂覆盖物 配制2%的琼脂,用微波炉加热至沸腾。然后,将琼脂与2X培养基混合,搅拌均匀,直到手感温度约为40℃。 覆盖病毒 弃去病毒液,加入琼脂覆盖物,然后将6孔板再次放入37℃的培养箱中,培养48到72小时。 固定细胞 犠 每孔加入4%的多聚甲醛,覆盖即可,固定时间为0.5到1小时。 挑出琼脂覆盖物 加 用牙科针沿着边缘勾下琼脂覆盖物,避免碰到细胞。 染色 芠 每孔加入0.5%的结晶紫染色液,覆盖即可,染色时间为0.5到1小时。 冲洗和干燥 染色结束后,吸出结晶紫,用三级水冲洗干净,然后自然晾干或用电吹风吹干。 计数空斑 𘊠 在LED灯箱上拍照,数出每孔的平均空斑数,并计算空斑形成单位(PFU/mL)。 计算结果 每孔病毒被种聚《㗧 毒稀释度,最终计算出铵盐中的氮含量。 通过以上步骤,我们就可以准确地测定铵盐中的氮含量,深入了解铵盐的性质和用途。希望这个实验能帮助你更好地理解化学实验的原理和方法。
医学类国自然青年基金标书范文 青年项目国自然基金标书范文!无删减版 젥ꌦ段: 免疫组学染色法检测宫颈癌组织中YTHDF2的表达 组织标本经甲醛固定后石蜡包埋,连续3-4um切片,采用免疫组织化学法染色。常规石蜡切片脱蜡脱水,采用柠檬酸缓冲液抗原修复后,灭活内源性过氧化物酶。PBS清洗3次,山羊血清37℃封闭30min,倾去血清,滴加兔抗YTHDF2抗体。 젧𛆨系复苏、传代、培养及慢病毒包装、感染细胞及筛选、分组: 细胞系复苏、传代 细胞系培养及慢病毒包装 感染细胞及筛选 分组:YTHDF2-sh1组、YTHDF2-sh2组、YTHDF2-shNC组 젦建宫颈癌小鼠模型,注射药物,检测宫颈癌细胞YTHDF2的mRNA水平、蛋白水平、增殖情况和细胞凋亡: 注射药物 给药3周后测定肿瘤mRNA水平、蛋白水平、增殖情况和细胞凋亡 젥析m6A甲基化修饰调控结合蛋白YTHDF2对宫颈癌发病及顺铂耐药的相关机制: 免疫组学染色法检查宫颈癌组织中YTHDF2的表达 组织标本经甲醛固定后石蜡包埋,连续3-4um切片,采用免疫组织化学法染色。常规石蜡切片脱蜡脱水,采用柠檬酸缓冲液抗原修复后,灭活内源性过氧化物酶。PBS清洗3次,山羊血清37℃封闭30min,倾去血清,滴加兔抗YTHDF2抗体。 整理数据,撰写报告: 整理实验数据 撰写实验报告 通过以上方法,我们旨在探究YTHDF2在宫颈癌发病及顺铂耐药中的具体作用,为后续的治疗和预防提供理论依据。
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