当前位置：网站首页 » 观点 » 内容详情

dapi染色权威发布_dapi染色是活细胞还是死细胞(2024年11月精准访谈)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：观点更新日期：2024-11-29

dapi染色

浙大读博日常：细胞骨架免疫荧光初体验最近在浙大读博，终于鼓起勇气尝试了一下细胞骨架染色，用的是鬼笔环肽来标记微丝。虽然第一次做，但效果还不错，至少能清楚看到微丝的存在，真是让人开心得不得了。为了拍这些照片，我可是花了四个小时在共聚焦显微镜下，真是要看吐了。不过，老板花了五百大洋，值了！ 𐟓 实验步骤如下：固定细胞：用4%多聚甲醛室温下固定20分钟。破膜处理：加入0.1%的Triton X-100，室温下处理5分钟。封闭：用BSA封闭液室温下封闭0.5到1小时。一抗孵育：用OPN抗体，4℃过夜孵育。二抗染色：用AF488标记的二抗，室温下处理1小时。 Actin染色：用Tracker Red 555微丝荧光探针染色。 DAPI染色：用DAPI染料室温下处理10分钟。封片：用抗荧光淬灭封片剂（5ul）和指甲油封片。保存：用锡箔纸包好，4℃保存。有个小疑问，为什么细胞核有的大有的小？那些小小的细胞核是不是也是BMSC？还是说原代培养中混入了其他细胞？或者是还没长开的年幼BMSC？又或者是已经成骨分化的成骨细胞？顺便问一下，有没有好用的DAPI推荐？我这次用的DAPI染了十分钟，拍的时候电压调到180还要降背景才能拍出这种效果，真是累得不行。

细胞骨架染色全攻略：从实验到结果细胞鬼笔环肽染色是一种非常重要的实验技术，用于观察和研究细胞骨架中微丝（主要由肌动蛋白组成）的分布。通过这种染色方法，研究者可以直观地了解细胞骨架的结构和动态变化，这对理解细胞的运动、形态维持和细胞分裂等过程至关重要。实验步骤详解样本准备：使用细胞爬片技术，在培养皿中让细胞贴壁生长，形成单层细胞。细胞固定：用PBS（磷酸盐缓冲液）清洗细胞3次，每次5分钟，以去除培养基和其他杂质。然后，用4%多聚甲醛溶液室温固定细胞20分钟，这一步骤的目的是使细胞内的蛋白质保持其天然形态，防止在后续处理过程中发生变形或降解。清洗：再次用PBS清洗细胞3次，每次5分钟，以去除多聚甲醛残留。鬼笔环肽染色：取适量（如200）配置好的FITC（荧光素异硫氰酸酯）标记的鬼笔环肽工作液，覆盖在铺满细胞的爬片上。室温孵育30-60分钟，让鬼笔环肽充分结合到纤维状肌动蛋白上。再次清洗：用PBS清洗玻片3次，每次10分钟，以去除未结合的鬼笔环肽。细胞核染色：使用200 DAPI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚）染色液对细胞核进行染色，染色时间通常为10分钟。DAPI能够穿透细胞膜与细胞核中的DNA结合，发出蓝色荧光。最终清洗与封片：再次用PBS清洗3次，每次10分钟，以去除DAPI残留。吸去多余水分，加上荧光封片液，以防止荧光淬灭，并盖上盖玻片。观察与拍照：在荧光显微镜下观察染色结果，并拍摄照片。FITC标记的鬼笔环肽会发出绿色荧光，显示微丝在细胞中的分布；DAPI则发出蓝色荧光，标记细胞核的位置。染色示例通过细胞鬼笔环肽染色，研究者可以看到细胞骨架中微丝形成的网络结构，这些微丝在细胞内呈现出复杂的交织形态，对维持细胞形态、参与细胞运动等过程起着重要作用。同时，结合DAPI染色显示的细胞核位置，可以进一步分析微丝与细胞核之间的空间关系，为深入研究细胞骨架的功能提供重要线索。

Annexin V-PI染色，测凋亡！细胞凋亡是生物学中一个复杂但至关重要的过程，它涉及多种分子和染色方法。其中，Annexin V-PI染色是一种相对简单的双染方法，用于检测细胞凋亡。让我们深入了解一下这种方法的工作原理和操作步骤。 𐟔 细胞凋亡的标志细胞凋亡过程中，细胞核会变形、浓缩、碎裂，这可以通过Hoechst染色或DAPi染色来观察。此外，细胞膜也会发生变化，部分膜会包裹细胞内容物形成凋亡小体，这可以通过电子显微镜观察到。还有一种变化是细胞膜破损外翻，这可以用标记细胞膜内侧的染料来检测，配合检测细胞核内物质的染料进行双染，判断细胞凋亡的进程。 𐟒᠁nnexin V-PI染色的原理 Annexin V是一种钙依赖性磷脂结合蛋白，能够特异性结合凋亡细胞膜外层的磷脂酰丝氨酸。正常细胞的磷脂酰丝氨酸位于细胞膜磷脂双分子层的内层，而凋亡细胞的磷脂酰丝氨酸则位于外层。因此，Annexin V可以通过钙依赖的方式结合凋亡细胞的磷脂酰丝氨酸。 𐟧ꠦ“作流程制备细胞悬液：用不含EDTA的胰酶消化细胞，制备细胞悬液，2000rpm离心5分钟，弃上清。洗细胞：用PBS洗一次，再用1x binding buffer洗一次。调整细胞浓度：使用1x binding buffer将细胞浓度调整为1-5x10^6/ml。 Annexin V染色：取100ul细胞悬液，加入5ul荧光标记的Annexin V，室温避光孵育10-15分钟。洗细胞：用1x binding buffer洗一次，200rpm离心5分钟，200ul 1x binding buffer重悬细胞。 PI染色：加入5ul PI，混匀。流式测定：使用专用软件分析流式数据，得到凋亡细胞比例。 𐟓Š 数据处理与绘图定量分析：使用专用软件分析流式数据（可以使用flowJo），得到凋亡细胞比例。将3次独立重复的数据都分析完后进行统计分析并绘制柱状图。读图指南：在Annexin V-PI染色中，PI+细胞碎片代表晚期凋亡细胞，Annexin V+ PI-代表早期凋亡细胞，Annexin V+ PI+代表正常细胞。 𐟔젥𞋥ˆ†析例如，Jurkat细胞在经过抗Fas抗体处理后，可以通过Annexin V-PI染色来检测细胞的凋亡情况。通过对比不同处理条件下的细胞染色结果，可以定量分析细胞的凋亡比例。 𐟓Œ 小贴士在进行Annexin V-PI染色时，建议多加一组未染色的组，以便于寻找目标细胞群。在实验设计时，可以考虑添加阴性对照和空白对照，以增加实验的可信度。通过这些步骤和技巧，你可以精确地检测到细胞的凋亡情况，为生物学研究和药物开发提供有力支持。

𐟧Š𐟒᥆𐥈‡免疫荧光小白全攻略✨ 𐟔 想要掌握冰切免疫荧光技术？看这里就够了！ 𐟌Ÿ 关键点速览： 1️⃣ 小鼠心脏灌注要彻底，避免非特异信号哦！ 2️⃣ 破膜封闭要梯度尝试，找到最适合你的破膜液和血清浓度。 3️⃣ 一抗选择很关键，建议多翻文献，选最优公司。 4️⃣ 漂洗要充分，让片子在溶液中“舞动”起来。 𐟓 详细步骤来啦： 1️⃣ 复温：冰冻切片先放冰箱外半小时，让它暖暖身子。 2️⃣ 漂洗：轻轻洗去切片上的杂质。 3️⃣ 破膜封闭：根据目的蛋白位置决定，膜上可直接封，胞内建议破膜10-15min。 4️⃣ 一抗：4度冰箱放16-20小时，让抗体充分结合。 5️⃣ 复温：再放20-30分钟，让抗体更稳定。 6️⃣ 漂洗：再次清洗切片。 7️⃣ 二抗：室温放1.5小时，让二抗与一抗结合。 8️⃣ 漂洗：再次清洁切片。 9️⃣ DAPI染色：给细胞核染色，更清晰观察。 𐟔Ÿ 封片：最后一步，让切片更美观。 𐟒ᠥ𐏨𔴥㫯𜚥ꌨ€—材要新鲜哦，这样才能事半功倍！ 𐟎‰ 现在你已经是冰切免疫荧光小达人啦！快去试试吧！

细胞染色全攻略：从零开始到实验结果细胞染色其实并不复杂，只要按照步骤来，你也能轻松搞定。今天我就来分享一下我们在实验室常用的细胞染色方法和操作步骤，希望对大家有帮助。准备工作 𐟧ꊩ斥…ˆ，你需要消化并收集细胞，然后以2-10㗱0Ⳡcell/coverslip的密度接种到24孔板中。滴加50-100⵬的细胞悬液，2小时后补加500⵬的10%FBS+DMEM。培养细胞 𐟌𑊥𐆲4孔板放入37℃的细胞培养箱中培养48小时，然后用显微镜观察。选择细胞状态和数量都合适的玻片进行染色。固定细胞 𐟔犥Ž𛦎‰旧的培养液，用冰冷的PBS洗两次。然后加入0.5ml的3.7-4%甲醛（在PBS中），室温固定10分钟。穿膜处理 𐟌Š 再用PBS洗两次，加入0.5ml的穿膜液（0.1% triton X-100 + 0.1M Gycine），冰上放置30分钟。封闭非特异性结合 𐟛᯸ 再次用PBS洗两次，加入0.3ml的5mg/ml BSA，室温封闭1小时。一抗孵育 𐟐𐊧”萂S洗两次，取一张封口膜，标记好，加入25⵬的一抗（用5mg/ml BSA稀释1：50-100）。将盖玻片细胞面朝下反扣在一抗液滴上，放在湿盒中室温孵育1-3小时。然后小心夹起盖玻片，细胞面朝上放入原来的24孔板中，再用PBS洗两次。二抗孵育 𐟐‘ 取另一张封口膜，标记好，加入25⵬的二抗（羊抗兔罗丹明，用5mg/ml BSA稀释1：50-100）。将盖玻片细胞面朝下反扣在二抗液滴上，放在湿盒中室温黑暗中孵育1-3小时。 DAPI染色 𐟒™ 用PBS洗两次，将玻片与10⵬的DAPI（1ⵧ/ml in PBS，贮存液：1mg/ml in dd H2O）室温孵育1-5分钟。封片与观察 𐟔슧”萂S洗三次，擦干玻片背面的水分，封片于载玻片上，标记好（时间、细胞名称、实验内容、号码）。待封片胶干后，可以在荧光显微镜下观察。观察时注意记录每张玻片的内容，以免混淆。观察完后将玻片放-20℃保存。简化操作 ⚡ 如果你只观察转染了EYFP的荧光蛋白，不需要给内源蛋白染色，可以直接用DAPI染核后封片。为了保证实验的重复性，每次最好做平行2组以上。对照组设置 𐟧ꊤ𛥂SA (5mg/ml)代替一抗，二抗照加为染色的对照组，做法同上。希望这些步骤能帮到你，让你的细胞染色实验更加顺利！如果有任何问题，欢迎留言讨论哦！

𐟧즗 水乙醇处理酵母需灭菌吗？ 𐟤”你是否在实验中遇到过需要使用无水乙醇处理酵母的情况？在dapi染色酵母的实验步骤中，有一环节要求用100%乙醇处理酵母30分钟，而protocol推荐使用sigma的100%乙醇。𐟤𗢀♀️那么，如果实验室没有sigma的乙醇，使用普通无水乙醇会有什么影响呢？是否需要过滤除菌呢？ 𐟔首先，我们要明确，无水乙醇本身就是一种灭菌剂，其浓度为100%，能有效杀灭大部分微生物。然而，在实验室操作中，为了确保实验结果的准确性和安全性，使用前最好进行过滤除菌处理。 𐟒᥻𚨮š在处理酵母时，如果实验室条件允许，最好使用sigma或其他信誉良好的品牌的100%乙醇。如果无法获取，也可使用实验室普通无水乙醇，但务必确保在使用前进行过滤除菌处理。 𐟔奮‰全提示：在处理乙醇时，请务必遵守实验室安全规范，避免使用易产生火花的工具，并确保在干燥、通风的环境中进行操作。如有任何不适，请立即就医。 𐟒ᥰ贴士：实验过程中，请务必做好个人防护，佩戴好实验室防护用品，如手套、口罩等。同时，为了确保实验数据的准确性，建议重复实验并记录详细数据。

DAPI染色液推荐：哪家产品更适合你？ 𐟔 探索DAPI染色液的奥秘，为您的细胞染色需求找到最佳选择！DAPI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐）是一种强大的蓝色荧光染料，能够与DNA中的A、T碱基结合，为细胞核染色提供卓越效果。 𐟒ᠤ𚆨磄API： DAPI染色液为即用型，可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色。最大激发波长为340nm，最大发射波长为488nm，与双链DNA结合后，最大激发波长变为364nm，最大发射波长为454nm。 DAPI的发射光为蓝色，与绿色荧光蛋白GFP或红色荧光染剂Texas Red的发射波长仅有少部分重叠，使得多重荧光染色成为可能。 𐟧ꠥꌦ�ꤧ🰯𜚊固定细胞或组织样品，适当洗涤去除固定剂。对于贴壁细胞或组织切片，加入少量DAPI染色液覆盖样品；对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积3倍的染色液，并混匀。室温放置3-5分钟，吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。直接在荧光显微镜下观察或封片后观察，凋亡细胞的细胞核会呈致密浓染或碎块状致密浓染。 𐟏… 选择最佳产品：在众多DAPI染色液品牌中，ZoFtic的CS301 10mL DAPI染色液以其卓越的染色效果和便利的使用方法脱颖而出。 𐟌Ÿ 细胞染色探针大全：细胞核荧光探针：DAPI、Hoechst 3342、PI、绿色活&死细胞核染料、红色活细胞核染料、EMA、EthD-I、SYTO 9Green、DRAQS、DRAQ7、Y啶橙细胞质荧光探针：CalceinAM、Calcein blue AM、BCECFAM、细胞质蓝色/绿色荧光探针、CFDA SE、CDCFDA SE、单溴二胺细胞膜荧光探针：DiO（绿色）、Dil（橙红色）、DID（红色）、DiR（紫红色）线粒体荧光探针：Orange CMTMRos（橙色）、Red CMXRos（红色）、MitoMaker Green、MitoSOXRed、罗丹明123、二氢罗丹明123、JC-1、JC10 溶酶体荧光探针：LysoView Blue、Green、Red荧光探针高尔基体荧光探针：NBD C6-Ceramide、BDP TR-Ceramide、GolgiTrackGreen 内质网荧光探针：DioC6(3)绿色细胞骨架荧光探针：ActinGreen488绿色、Red555红色氧敏感指示荧光探针：Tris(4,7-dipheny-1,10-phenanthroline)ruthenium(II) dichloride 离子探针：钙离子、氯离子、活性氧 𐟔 选择适合您的DAPI染色液，让您的细胞染色实验更加精准和高效！

DiO和DAPI染色时遇到的几个问题在进行DiO和DAPI染色时，我遇到了一些有趣的现象和疑问。首先，为什么在40x镜下观察时，DiO的荧光会迅速淬灭呢？𐟤”看着荧光逐渐消失，我不得不迅速调整焦距并拍照，以凸显其荧光。关于DiO染细胞膜的方法，我是先对活细胞进行染色（10umol/ml，15分钟），然后进行固定。在这个过程中，我没有进行通透处理。尽管如此，DAPI依然能够成功染色细胞核。然而，DAPI染出的细胞核效果有些出乎意料。𐟘𒦈‘发现DAPI和DiO的染色部分重叠，这让我有些困惑。为了减少这种重叠，我尝试通过调整对比度来解决。总的来说，这些染色实验中出现的现象和问题让我对荧光染色的复杂性和微妙性有了更深的理解。𐟔쥸Œ望这些经验能对其他研究者有所帮助。

共聚焦显微镜使用指南：防忘版嘿，大家好！今天我想跟大家分享一下如何使用共聚焦显微镜。作为一个实验室小白，我深知忘记步骤的痛苦，所以特地整理了一份防忘版的使用指南，希望能帮到大家。预约实验室时间 𐟓… 首先，记得提前预约公共实验室的时间。这样你就可以确保你有足够的时间进行实验，避免和其他人抢时间。开机步骤 𐟔犨🛥…奮ž验室后，按照以下步骤打开设备：从左到右依次按下按钮。扭动钥匙，打开激光。打开电脑上的软件，按照图示进行设置。观察样品 𐟔 接下来，观察DAPI染色的烟草。正面朝上盖上盖薄片，然后盖薄片朝下对着物镜。如果你需要观察免疫荧光制片，记得在镜头上加油。观察模式 𐟌ˆ 在软件中，你可以选择不同的观察模式： BF➕IL-shutter：明场观察。 FLUO➕DAPI：观察蓝色荧光（细胞核）。 FITC：观察绿色免疫荧光。 TXR：观察红色。保存文件 𐟒𞊥𝓤𝠥ˆ实验后，记得保存文件。点击停止live，然后点击start进行拍照。保存到电脑本地文档后，打开浏览器，登录云端账号（密码在桌面文档），将文件上传到云端。结果解读 𐟧슧𛿨‰𒨍祅‰通常表示载体表达的蛋白和荧光融合蛋白。绿色GFP和蓝色DAPI重合说明蛋白进入了细胞核。荧光二抗显示红色，比如一抗是h3k9me抗体，那么红色表示细胞核中组蛋白具有h3k3me，红色亮度大小可以表示甲基化程度。如果载体转入的是去甲基化酶，空载为绿蓝红都亮，表示具有甲基化。带有蛋白的载体为绿蓝亮，红不亮或变弱，表明该蛋白具有去甲基化酶活性。希望这份指南能帮到大家，祝大家实验顺利！如果有任何问题，欢迎留言讨论哦！

免疫荧光染色全攻略：从破膜到封片免疫荧光染色是一种常用的细胞生物学技术，用于检测细胞内特定蛋白质的分布和定位。以下是详细的实验步骤和结果判读方法： 2. 实验步骤 2.1 细胞破膜：将爬片稍甩干后，用组化笔在盖玻片中间细胞分布均匀的位置画圈，以防止抗体流走。然后加入50-100破膜工作液，室温孵育20分钟。之后用PBS洗3次，每次5分钟。如果是膜蛋白染色，则不做破膜处理。 2.2 血清封闭：在圈内滴加3%BSA或10%驴血清（如果一抗是山羊来源），室温封闭30分钟。 2.3 加一抗：轻轻甩掉封闭液，在细胞孔板里滴加按一定比例配好的一抗，细胞培养板平放于湿盒内4Ⰳ孵育过夜。 2.4 加二抗：细胞孔板置于脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5分钟。然后加入对应的二抗，室温孵育50分钟。 2.5 DAPI复染细胞核：爬片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5分钟。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10分钟。 2.6 封片：爬片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5分钟。玻片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。 2.7 采集图像：DAPI激发波长330-380nm，发射波长420nm；488激发波长465-495nm，发射波长515-555nm；CY3激发波长510-560nm，发射波长590nm；CY5激发波长608-648nm，发射波长672-712nm。 3. 结果判读 DAPI通道细胞核为蓝色，488通道阳性为绿色，CY3通道阳性为红色，CY5通道阳性为粉色。

专栏内容推荐

920 x 690 · jpeg
DAPI染色原理及DAPI染色步骤
素材来自:luyoruv.com
600 x 400 · png
DAPI
素材来自:luyoruv.com

599 x 825 · jpeg
怎么使用DAPI进行染色 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com
1920 x 1440 · jpeg
DAPI染色液
素材来自:cmvbio.cn

930 x 916 · jpeg
DAPI染色原理及DAPI染色步骤
素材来自:luyoruv.com
888 x 885 · jpeg
上海多沃生物科技有限公司
素材来自:dowobio.com

6000 x 4000 · jpeg
DAPI染色液(10ug/ml)_雷根生物
素材来自:news.leagene.com
460 x 257 · png
DAPI（活细胞和固定细胞染色液），即用型 - 知凡生物-科研试剂 l 官网
素材来自:zfdows.com

500 x 500 · jpeg
DAPI染色_染色实验-上海达为科生物科技有限公司
素材来自:chem17.com
2688 x 2592 · jpeg
DAPI染色液(10ml)-上海奥源生物科技有限公司
素材来自:biomerchan.com

669 x 360 · png
DAPI染色（原理、步骤） - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

593 x 437 · jpeg
DAPI(染色,使用方法) - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com
1044 x 794 · png
DAPI荧光染料-最具性价比的DNA染料，了解一下 - 每日生物评论
素材来自:bio-review.com

750 x 750 · jpeg
DAPI染色液细胞染色免疫荧光染色，染完毕后再进行DAPI染色
素材来自:b2b.baidu.com
481 x 484 · jpeg
DAPI（活细胞和固定细胞染色液），即用型 - 知凡生物-科研试剂 l 官网
素材来自:zfdows.com

750 x 750 · jpeg
DAPI染色液细胞染色免疫荧光染色，染完毕后再进行DAPI染色
素材来自:b2b.baidu.com
930 x 600 · jpeg
DAPI染色原理及DAPI染色步骤
素材来自:luyoruv.com

2539 x 3578 · jpeg
DAPI 染色液_威奥生物
素材来自:biotechwell.com
1071 x 315 · png
DAPI(染色,使用方法) - 哔哩哔哩
素材来自:bilibili.com

1000 x 667 · jpeg
DAPI染色原理及DAPI染色步骤
素材来自:luyoruv.com
954 x 636 · jpeg
上海多沃生物科技有限公司
素材来自:dowobio.com

1200 x 900 · jpeg
DAPI染色液（即用型）_苏州优逸兰迪生物科技有限公司
素材来自:uelandy.com
294 x 219 · png
DAPI（活细胞和固定细胞染色液） - ZFdows Bio-知凡生物
素材来自:zfdows.com

850 x 818 · jpeg
DAPI staining images showing induction of apoptosis by Acetylshikonin... | Download Scientific ...
素材来自:researchgate.net
769 x 527 · jpeg
荧光DAPI染色_病理染色_北京晶莱华科生物技术有限公司
素材来自:genelb.cn

500 x 375 · jpeg
dapi染色的意义 - 百度文库
素材来自:wenku.baidu.com
750 x 750 · jpeg
DAPI染色液细胞染色免疫荧光染色，染完毕后再进行DAPI染色产品关键词:免疫荧光dapi染色;dapi免疫荧光;dapi染色荧光;dapi)荧光染色;dapi细胞免疫荧光;dapi免疫荧光 ...
素材来自:b2b.baidu.com

1000 x 667 · jpeg
DAPI染色原理及DAPI染色步骤
素材来自:luyoruv.com
800 x 800 · jpeg
DAPI染色液 - 武汉尚恩生物技术有限公司
素材来自:sunncell.com.cn

930 x 620 · jpeg
DAPI染色原理及DAPI染色步骤
素材来自:luyoruv.com
550 x 414 · jpeg
DAPI:簡介,歷史,螢光屬性,活細胞毒性,替代,_中文百科全書
素材来自:newton.com.tw

600 x 450 · jpeg
DAPI 染色液,DAPI Stain Solution 生命科学产品与技术服务-生工生物工程(上海)股份有限公司
素材来自:store.sangon.com
930 x 337 · png
DAPI染色原理及DAPI染色步骤
素材来自:luyoruv.com

500 x 441 · jpeg
DAPI染色_合肥德尔夫生物科技有限公司
素材来自:hfdelf.com
550 x 294 · jpeg
DAPI染色原理及DAPI染色步骤
素材来自:chemicalbook.com

素材来自:查看更多內容

当前用户设备UA：Mozilla/5.0 AppleWebKit/537.36 (KHTML, like Gecko; compatible; ClaudeBot/1.0; +claudebot@anthropic.com)