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jurkat权威发布_lps刺激jurkat细胞(2024年12月精准访谈)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：观点更新日期：2024-12-01

jurkat

细胞培养基的选择指南 𐟌𑊧𛆨ƒž培养基是细胞生长和繁殖的基础，它们为细胞提供必要的营养和生长环境。通常，培养基包含碳水化合物、含氮物质、无机盐、维生素和水。以下是几种常见的培养基类型及其特点： DMEM 𐟧슄ulbecco's Modified Eagle Medium（DMEM）是最常用的改良式Eagle's培养基。DMEM与MEM含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。它主要用于快速生长的细胞，分为低糖（1000mg/L）和高糖（4500mg/L）两种。DMEM含有更高浓度的NaHCO3，需要用10%的CO₂来平衡，也可以在较低CO₂浓度下使用。DMEM-高糖适合高密度悬浮细胞培养，而DMEM-低糖则适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞。 MEM 𐟌𑊍EM（Minimal Essential Medium）是最基本的培养基，最初设计用于培养HeLa细胞和部分哺乳类成纤维细胞。MEM含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素，适合多种细胞单层生长。以MEM为基础，Stanner利用Earle's Balanced Salts和非必需胺基酸（NEAA）进一步配制成MEM-Alpha培养基，可广泛用于哺乳动物细胞的培养。 RPMI-1640 𐟧𔊒PMI-1640的营养成分相对简单，比DMEM少一点糖和谷光甘肽，广泛应用于许多种正常细胞和肿瘤细胞、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞、杂交瘤细胞的培养。其他如K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等也可使用RPMI-1640培养基。 DMEM/F12 𐟌🊆12培养基成分丰富，含有多种微量元素，与DMEM以1:1结合，称为DMEM/F12培养基，作为无血清培养基的基础。这种培养基适用于多种细胞的生长和繁殖。选择合适的培养基对于细胞的生长和实验的成功至关重要。希望这些信息能帮助你更好地选择适合你的细胞培养基！

Annexin V-PI染色，测凋亡！细胞凋亡是生物学中一个复杂但至关重要的过程，它涉及多种分子和染色方法。其中，Annexin V-PI染色是一种相对简单的双染方法，用于检测细胞凋亡。让我们深入了解一下这种方法的工作原理和操作步骤。 𐟔 细胞凋亡的标志细胞凋亡过程中，细胞核会变形、浓缩、碎裂，这可以通过Hoechst染色或DAPi染色来观察。此外，细胞膜也会发生变化，部分膜会包裹细胞内容物形成凋亡小体，这可以通过电子显微镜观察到。还有一种变化是细胞膜破损外翻，这可以用标记细胞膜内侧的染料来检测，配合检测细胞核内物质的染料进行双染，判断细胞凋亡的进程。 𐟒᠁nnexin V-PI染色的原理 Annexin V是一种钙依赖性磷脂结合蛋白，能够特异性结合凋亡细胞膜外层的磷脂酰丝氨酸。正常细胞的磷脂酰丝氨酸位于细胞膜磷脂双分子层的内层，而凋亡细胞的磷脂酰丝氨酸则位于外层。因此，Annexin V可以通过钙依赖的方式结合凋亡细胞的磷脂酰丝氨酸。 𐟧ꠦ“作流程制备细胞悬液：用不含EDTA的胰酶消化细胞，制备细胞悬液，2000rpm离心5分钟，弃上清。洗细胞：用PBS洗一次，再用1x binding buffer洗一次。调整细胞浓度：使用1x binding buffer将细胞浓度调整为1-5x10^6/ml。 Annexin V染色：取100ul细胞悬液，加入5ul荧光标记的Annexin V，室温避光孵育10-15分钟。洗细胞：用1x binding buffer洗一次，200rpm离心5分钟，200ul 1x binding buffer重悬细胞。 PI染色：加入5ul PI，混匀。流式测定：使用专用软件分析流式数据，得到凋亡细胞比例。 𐟓Š 数据处理与绘图定量分析：使用专用软件分析流式数据（可以使用flowJo），得到凋亡细胞比例。将3次独立重复的数据都分析完后进行统计分析并绘制柱状图。读图指南：在Annexin V-PI染色中，PI+细胞碎片代表晚期凋亡细胞，Annexin V+ PI-代表早期凋亡细胞，Annexin V+ PI+代表正常细胞。 𐟔젥𞋥ˆ†析例如，Jurkat细胞在经过抗Fas抗体处理后，可以通过Annexin V-PI染色来检测细胞的凋亡情况。通过对比不同处理条件下的细胞染色结果，可以定量分析细胞的凋亡比例。 𐟓Œ 小贴士在进行Annexin V-PI染色时，建议多加一组未染色的组，以便于寻找目标细胞群。在实验设计时，可以考虑添加阴性对照和空白对照，以增加实验的可信度。通过这些步骤和技巧，你可以精确地检测到细胞的凋亡情况，为生物学研究和药物开发提供有力支持。

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