当前位置：网站首页 » 热点 » 内容详情

传代培养最新视觉报道_继代培养的基本步骤(2024年12月全程跟踪)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：热点更新日期：2024-12-03

传代培养

细胞培养全攻略：从零开始到专家嘿，大家好！今天我们来聊聊细胞培养的基础知识，特别适合刚入门的小伙伴们。准备好你们的笔记本，我们开始吧！实验室介绍 𐟏š️ 首先，咱们得先了解一下实验室的基本构造。细胞培养实验室通常有三个房间：缓冲间、无菌操作室和准备室。每个房间都有特定的功能，比如缓冲间是防止空气对流，无菌操作室则是进行实验的地方。进入实验室前，记得换上专用的拖鞋和实验服，戴好口罩和帽子。主要设备 𐟔슧𛆨ƒž培养需要用到一些关键设备，比如培养箱、超净工作台、倒置显微镜等。培养箱是用来模拟体内环境，让细胞生长和繁殖的地方。超净工作台则是进行无菌操作的地方，确保实验环境干净无污染。倒置显微镜则是用来观察细胞的生长情况。细胞培养基础 𐟌𑊧𛆨ƒž培养分为原代培养和传代培养。原代培养是从机体中取出组织后进行的首次培养，而传代培养则是将原代细胞增殖到一定密度后，经过处理再转移到新的培养瓶中继续培养。传代的次数就是细胞的代数。无菌操作 𐟧𜊦— 菌操作是细胞培养的关键，所有与实验无关的物品一律不能带入实验室。进入实验室后，要穿戴好工作服、口罩和鞋套。吸管使用前、培养瓶开启之前以及合盖前都要在酒精灯附近操作，确保无菌环境。细胞传代操作 𐟧스𜠤𛣦“作需要用到胰蛋白酶和EDTA溶液来消化细胞。消化时间要把握好，一旦胞质回缩、连接变松散或有成片浮起的迹象就要立即终止消化。消化后的细胞要用无菌吸管吹打分散，然后分装到新的培养瓶中继续培养。注意事项 ⚠️ 严格无菌操作：所有操作都要在超净工作台内完成，确保无菌环境。适度消化：消化时间要把握好，避免过度消化导致细胞死亡。观察细胞形态：在消化过程中要注意观察细胞的形态变化，及时终止消化。好了，今天的细胞培养基础就聊到这里。希望对大家有所帮助！如果有任何问题，欢迎留言讨论哦！

4T1小鼠乳腺癌细胞培养与传代全攻略 𐟔젧𛆨ƒž培养指南 𐟔슴T1细胞复苏步骤将含有1mL 4T1细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻。加入4mL培养基，混合均匀。在1000rpm条件下离心3分钟，弃去上清液，加入1-2mL培养基，轻轻吹匀。将所有4T1细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中，培养过夜。第三天换液并检查4T1细胞密度。 4T1细胞传代步骤当4T1细胞密度达到80%-90%时，进行传代培养。弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗4T1细胞1-2次。加入1mL消化液（0.25% Trypsin-0.02% EDTA），使消化液浸润所有细胞。将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3分钟，观察细胞消化情况。若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将4T1细胞悬液按1:2比例分到新的含8mL培养基的新皿中或瓶中，置于培养箱中培养。 4T1细胞冻存步骤待4T1细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。以下以T25瓶为例：收集4T1细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000rpm条件下离心4分钟，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。根据4T1细胞数量对应加入无血清细胞冻存液，使细胞密度为5㗱06~1㗱07/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液。将冻存管放入-80℃冰箱，24小时后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。培养注意事项 𐟓‹ 该细胞生长速度快，细胞汇合度越高越难消化，建议分次消化。一次消化至有细胞移动漂浮时终止，再进行二次消化剩余的细胞，尽量消化成单颗细胞。细胞传代第二天有少量细胞团贴壁未展开为正常现象，继续培养细胞会展开。若在培养时出现细胞变圆现象，有可能是细胞密度过大，无法展开的原因，可通过降低传代密度来改善。推荐生长培养基为RPMI-1640+10% FBS+1% P/S。收货指南 𐟓抴T1细胞瓶到货后处理方案：验货：检查培养瓶上的标签、培养瓶完好性以及瓶口是否有漏液。处置：用75%酒精对培养瓶消毒后，放入37℃、5% CO2的培养箱静置培养2-4小时后进行显微观察、拍照，作为售后维权依据。注意：贴壁细胞在运输过程中发生细胞脱落是正常的，静置后可恢复贴壁。冻存管到货后处理方案：验货：检查包装的标签、包装内是否有干冰、冻存管完好性。处置：尽快复苏（见培养方法）或程序降温后转移至液氮中保存。

细胞培养技术：从基础到实践细胞培养是生物学和医学研究中的一项关键技术。根据实验需求，我们会选择不同类型的细胞进行实验。同一组织的细胞由于其来源、培养方式和建系方法的不同，可能有多种不同的名称，并且具有不同的应用场景。细胞培养是指将细胞从动物或植物体内取出，并在适宜的人工环境中使其生长的过程。细胞可以通过直接从组织中取出并通过酶或机械方法进行解离，或者来源于已建立的细胞系或细胞株。正常细胞通常只能分裂有限的次数，随后会丧失增殖能力，这是由遗传基因决定的，也被称为衰老。此类细胞系被称为有限细胞系。然而，一些细胞系可以通过特殊过程变为永生化细胞系，这个过程可以自发发生，也可以通过化学或病毒诱导发生。当一个有限的细胞系经历转化并获得无限分裂的能力时，它就成为了一个连续细胞系。细胞培养主要分为原代培养和细胞系培养。原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养，并在适宜条件下增殖。严格地说，从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段即为原代培养，但实际上，通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。一般持续1-4周。此期细胞呈活跃的移动，可见细胞分裂，但不旺盛。第一次传代培养后，原代培养物即被称为细胞系。来自于原代培养的细胞系寿命有限，随着细胞的传代，生长能力最强的细胞会占据优势，最终导致细胞群体在基因型和表型上达到一定程度的均一性。如果通过克隆或其他方法从培养物中阳性筛选出了细胞系的亚群，则该细胞系成为一个细胞株。与亲代细胞系起始时相比，细胞株通常会获得一些其他的遗传学改变。各种细胞的培养条件相差很大，但培养细胞的人工环境必须包括合适的容器，其中含有一定的基质或培养基，为细胞提供必需的营养物质（氨基酸、碳水化合物、维生素、矿物质）、生长因子、激素和气体（O2、CO2），并调节生理化学环境（pH、渗透压、温度）。大多数细胞为贴壁依赖性细胞，必须附着于固体或半固体基质上培养（贴壁培养或单层培养），而另一些细胞则可在培养基中漂浮生长（悬浮培养）。一些特殊的难以贴壁的细胞可以在培养瓶/皿内添加细胞外基质(ECM)进行培养，以促进细胞粘附。

B16-F10细胞培养全攻略 𐟔젧𛆨ƒž基本信息英文名称：B16-F10 中文名称：小鼠皮肤黑色素瘤细胞种属：鼠源组织来源：皮肤品系：C57BL/6J 疾病：黑色素瘤 𐟌𑠧”Ÿ长特性与细胞形态生长特性：贴壁生长细胞形态：梭形细胞样；上皮细胞样 𐟔„ 传代与换液传代比例：1:2 ~ 1:4 换液频率：2~3次/周倍增时间：48-72h 𐟧ꠥŸ𙥅𛤽“系与条件培养体系：DMEM（高糖）+10%FBS+1%P/S 培养条件：5%CO2；37 ℃ ❄️ 冻存条件冻存液：Biochannel细胞冻存液程序降温：液氮长期保存 𐟌Ÿ 细胞培养特点 DMEM（含1.5g/L NaHCO3）培养基中生长良好，大部分品牌的DMEM含有较高浓度的NaHCO3（3.7g/L），若使用DMEM（3.7g/L NaHCO3）培养基培养细胞时需要提高CO2浓度（7%-10%）。推荐的基础培养基是DMEM（高糖）培养基。 DMEM培养的B16-F10细胞会分泌较多黑色素，而1640培养基则较少。可根据实验需求尝试更换培养体系，更换时建议留种。更换为DMEM培养液时，请确保血清和培养液质量，否则可能导致细胞不长、生长缓慢以及黑色素大量分泌。 𐟤” 常见问题解答收货时细胞出现伪足或碎片较多怎么办？受到运输影响，悬浮细胞会短暂性出现形态改变，如伪足等。通过传代培养，1周左右可以恢复正常。一些细胞在运输途中死亡而产生碎片，通过传代离心可以去除。培养过程中细胞发生贴壁怎么办？少量细胞贴壁属于正常情况，将细胞悬液转移至新瓶中即可。当贴壁细胞的比例高于20%，说明细胞生长环境有异常，需排查培养箱设置、培养基成分，以及培养器皿是否异常。培养过程中细胞发生聚团怎么办？少量细胞聚团，呈葡萄串状，属于正常现象，特别是细胞密度较低时。更换血清品牌或增大血清比例（不超过20%）有助于解决聚团问题。不建议将聚团的细胞吹散，等待密度高时，会自己分散开。培养基里一定要加巯基乙醇吗？ 巯基乙醇是一种常用的培养补充剂，有抗氧化的作用，可减少氧化应激对THP-1细胞的影响。当细胞密度过大但需要维持时，可适当增加巯基乙醇的比例（不超过标准量的1.5倍）。

Raw264.7培养，你做对了吗？ 𐟌𑠧𛆨ƒž复苏步骤：预热培养液：将完全培养液放入37℃水浴锅中预热30分钟。准备离心管：在超净台内，吸取7毫升完全培养液至15毫升离心管中。解冻细胞：将细胞从干冰中取出，用镊子夹住盖子放入37℃水浴中快速晃动，使细胞在1分钟左右完全融化。离心处理：将细胞悬液转移至提前准备好的完全培养液中，盖上盖子，以1100 rpm室温离心4分钟。重悬细胞：在超净台内吸弃上清，吸取1毫升完全培养液重悬细胞至单细胞悬液，转移至装有4毫升完全培养液的T25 cmⲥŸ𙥅𛧓𖯼ˆ或6厘米皿）中，标记细胞名称、复苏日期、代次，放置于37℃、5% CO2培养箱中培养。观察细胞：第二天观察细胞状态及贴壁情况。 𐟔‘ 复苏关键点：操作时间：复苏操作时间不宜过长，尽量在15分钟内完成。细胞状态：若复苏后24小时细胞状态不佳或分化较多，建议再次复苏时将细胞接种到六孔板中。避免大容器：请勿直接复苏到T75 cmⲧ“𖦈–10厘米皿。 𐟌𑠧𛆨ƒž传代步骤：汇合度：当细胞汇合度达到70-80%时进行传代，传代比例为1:3-1:6。吸出原液：吸出原培养液，直接吸取新鲜完全培养液轻柔吹打成单个细胞，在显微镜下观察细胞是否为单个细胞。接种传代：按一定比例接种传代，第二天观察细胞状态。 𐟔‘ 传代关键点：胰酶消化：该细胞不可用胰酶消化。血清质量：血清质量差异可能会对细胞生长有影响，建议使用高级血清进行培养，如果没有高级血清，可提高血清浓度进行培养。控制传代间隔：通过传代可以改善细胞分化的比例，由于Raw264.7细胞生长速度很快，一般2-3天即可传代，因此传代间隔不能超过三天，若超过会使细胞更容易分化，分化的细胞贴壁牢固，难于吹下，所以需要控制好每次的接种密度。处理分化细胞：若分化细胞占比很大，待细胞长至70-80%汇合度后用单道移液器将表面未分化的圆形细胞轻柔吹下转移至新的培养板里并吹成单细胞（注意接种密度，不可过稀），只吹一下即可，避免把分化的细胞也一并吹下培养，之后2-3次传代如上述操作可得到正常的细胞。

生物试剂百人计划试用，快来申请！各位学长学弟们，大家好！今天给大家带来一个超棒的机会——生物试剂百人计划试用！无论你是实验室小白还是资深科研达人，都可以来试试哦！特级胎牛血清：细胞培养的秘密武器 𐟐‚ 首先推荐的是我们的特级胎牛血清。这可是细胞培养的黄金标准，选它准没错！无论是部分原代细胞、干细胞还是肿瘤细胞系，都能轻松搞定。进口的来自乌拉圭，血源地纯净，质控严格，可追溯性超强。国产的也有，适合增殖旺盛的常规细胞系。 ProGroTM无血清培养基：干细胞的摇篮 𐟌𑊊接下来是ProGroTM无血清培养基，特别是为干细胞培养量身定做的。比如ProGroTM MSC KIT，专为间充质干细胞设计，用于人脐带间充质干细胞的原代分离和传代培养。还有ProGroTM CIK KIT和ProGroTM NK KIT，分别适用于免疫细胞的体外扩增和NK细胞的刺激活化。工程细胞培养：抗体生产的得力助手 𐟒‰ 如果你是做工程细胞培养的，那ProGroTM HybriSFM和ProGroTM 293SFM绝对是你的好帮手。前者用于杂交瘤细胞抗体生产，后者则适合293细胞的高密度无血清培养和蛋白表达。还有CHO无血清培养基和CHO-CD3 SFM，分别适用于CHO细胞的培养和转染。昆虫细胞培养：重组蛋白表达的好选择 𐟐› 昆虫细胞培养也是科研中的一大领域。ProGroTM InsectSFM适合Sf9及Sf21细胞的高密度悬浮培养及重组蛋白表达。还有TC-100昆虫培养基，适用于大部分鳞翅目昆虫细胞系。辅助试剂：让实验更高效 𐟧ꊊ最后推荐的是ProGroTM辅助试剂，特别是重组胰蛋白酶。这可是通过基因工程技术生产的非动物源性重组丝氨酸蛋白酶，纯度高、分子稳定、活性优异，而且生物安全性极高。还有普通的胰蛋白酶，适用于细胞解离、细胞传代和原代组织的解离。让我们一起在科学的道路上探索未知的领域！𐟚€

𐟎‰新细胞到手啦！𐟎‰ 𐟓栥Œ…裹终于到啦！打开一看，新买的细胞静静躺在T25培养瓶中。 𐟔 首先，得仔细检查包装是否完整，培养瓶有无破损或漏液哦。 𐟍𖠦Ž姝€，用75%的酒精轻轻擦拭培养瓶外部，然后放入37摄氏度、5%二氧化碳的细胞培养箱中，让细胞们安静地“睡”3-4小时。 𐟔젤𙋥Ž，取出培养瓶，用显微镜仔细观察细胞的生长情况。别忘了在不同倍数（40x, 100x, 200x）下拍照保存，为售后留个底哦。 𐟌𑠥悦žœ细胞密度达到80%以上，就要考虑传代培养啦。否则，就移除培养基，预留6毫升左右继续培养，等密度合适再传代。新细胞到手，一切都得小心翼翼地呵护它们哦！𐟒•

人表皮角质形成细胞的传代培养指南 𐟧슨ᨧš于皮肤的外层，主要由胚胎时期的外胚层形成，具有抗摩擦和抗损伤的作用。表皮是皮肤的浅层结构，由复层扁平上皮构成，从基底层到表面可分为五层：基底层、棘层、颗粒层、透明层和角质层。表皮角质形成细胞是一种能合成角质蛋白的上皮细胞，主要分布于表皮基底层。 𐟔젧𛆨ƒž传代步骤：细胞未长至85%时：用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到生物操作台内，严格无菌操作。打开细胞培养瓶，若培养瓶上无特殊标注，吸去剩余培养液，只留6-8ml培养液继续培养。细胞已长满（达85-95%）：弃去培养液，用PBS洗涤1-2次。加入1.0ml胰酶消化液，37℃消化（消化时间根据不同细胞及所用胰酶有差异）。显微镜下观察细胞消化情况，若细胞回缩变圆、透亮、轻拍瓶壁呈流沙样脱落，则迅速拿回操作台，加入至少双倍的完全培养液，终止消化并轻轻吹打细胞1-2次，使其变成单细胞悬液。将细胞收集于离心管中离心1000rmp/5min，弃上清，轻弹管底，将细胞弹散。加入新鲜培养基重悬细胞，进行传代。如果没有特别说明，建议收到细胞后的第一次传代比例为1:2。 𐟔젦𓨦„事项：观察细胞密度最好用4X物镜低倍镜观察，以便正确的判断细胞密度；观察细胞形态请用10X或20X高倍镜观察。推荐使用0.05%胰酶/EDTA消化液。瓶中运输的培养液不能重复使用，请换新鲜培养液培养。有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心重悬后接种到新瓶内。 𐟧𜠦𖈦𘎦“作：收到细胞后，请对细胞培养瓶外表进行消毒，将细胞置于培养箱中进行1-2小时的缓冲，待细胞恢复基本生长状态后，进行后续细胞实验。在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况。

𐟌𑦖𐦉‹必读ⷈK-2细胞培养全攻略𐟌𑊱️⃣ 细胞复苏：首先，将含有1mL细胞悬液的冻存管放入37℃的水浴中快速晃动，然后加入4mL培养基并搅拌均匀。接着，在1000RPM条件下离心4分钟，倒掉上清液，加入1-2mL培养基后吹匀。将所有细胞悬液加入培养瓶中过夜培养（或加入10cm皿中，加入大约8mL培养基，过夜培养）。第二天换液并检查细胞密度。𐟔 2️⃣ 细胞传代：当细胞密度达到80%-90%时，可以进行传代培养。𐟘Š (1️⃣) 直接倒掉培养容器中的培养上清。用PBS洗涤细胞2次，洗涤后的PBS直接倒掉，不需要保留。𐟚🊨2️⃣) 用PBS洗涤培养容器1~2次，把所有细胞悬液收集到离心管中，250g离心4分钟。⏰ (3️⃣) 离心后去除上清液。加入2mL预热的完全培养基，轻轻吹打细胞沉淀，充分吹散、混匀。𐟌꯸ (4️⃣) 把细胞按照(2.5~4.0) 㗱0^4个活细胞/cmⲧš„比例接种到适合的培养容器中。𐟔슦𓨦„：如果没有计数，也可以按照适当的比例进行传代。首次传代建议按照1:2进行，后续可以根据细胞实际生长情况参考说明书自由调整传代比例范围。𐟓 3️⃣ 细胞冻存：当细胞生长到可以传代的密度时，可以准备冻存啦！𐟆’ (1️⃣) 消化细胞，取少量细胞悬液进行计数。细胞悬液经过250g离心4分钟。𐟧ꊨ2️⃣) 离心后倒掉上清液，用适量4℃预冷的冻存液重新悬浮细胞。然后按比例或数量将细胞分装到冻存管中。一般冻存密度为(1.0~2.0)㗱0^6个/mL。𐟒犦𓨦„：如果用冻存液重悬计数后，细胞长时间放置在非培养条件下会严重影响细胞状态。请把细胞放在4℃的冰箱中以减缓细胞代谢，更好地保持细胞状态。❄️ (3️⃣) 使用海星一步冻存液时，直接把冻存管竖放在-80℃冰箱里就能完成“一步”冻存。如果使用程序冻存液，则需要先把冻存管放入提前预冷的程序降温盒中，然后再放入-80℃冰箱。𐟧ꢝ„️ (4️⃣) 24小时后，可以把冻存管转移到液氮中进行长期保存。⏳❄️ 注意：细胞不能长时间保存在-80℃冰箱中，请尽快在24小时内转移到液氮中保存。❄️𐟒Ž

「果蝇在中国空间站画面」神舟十九号航天员已将果蝇从天舟八号运飞船放置在空间站实验柜，开展亚磁果蝇实验。亚磁果蝇实验是我国首次在空间站开展亚磁，微重力环境对果蝇基因，生存繁衍的影响研究。这些果蝇将有望成为第一种在空间站实现“三代同堂”的动物，果蝇实验传代培养由航天员在软手套袋里面操作。航天员会从实验模块里面取出培养单元，然后把它转移到手套袋里面，手套袋里面有一个取样的气泵，把果蝇抽出来放到另外一个新的培养盒里面，从而将上行的这一代和在天上培养的一代分开。视频:中国载人航天办公室China航天的微博视频