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上样缓冲液前沿信息_sds-page电泳缓冲液(2024年12月实时热点)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：教程更新日期：2024-12-02

上样缓冲液

自制蛋白上样缓冲液，WB实验更稳定！自从进入实验室，我发现大部分实验试剂都是自己配置的，尤其是Western blot实验的一整套试剂，从头到尾都是自配的，非常稳定，实用效果非常好！今天就来分享一下如何配置各种蛋白上样缓冲液。 5xNative-PAGE Loading Buffer 𐟌🊥œ訿›行天然蛋白的研究分析时，需要使用非变性的蛋白上样缓冲液来处理样品，以保持蛋白的天然活性。相比变性的蛋白上样缓冲液，它不添加去垢剂和还原剂。以下是5xNative-PAGE Loading Buffer的配方（10 mL）： 0.25M Tris-HCL (pH 6.8) - 1M Tris-HCL (pH 6.8) 2.5mL 溴酚蓝 (BPB) - 0.5%（WM）0.05g 甘油 - 50%（WM）5mL dH₂O - 2.5mL 配置步骤：将所有组分混合均匀。室温或不超过37℃的水浴中溶解非变性蛋白，然后立即放置室温，尽量避免长时间水浴。各组分的作用 𐟔 十二烷基硫酸钠 (SDS)：破坏蛋白质的二级和三级结构，使其去折叠，覆盖蛋白质本身的电荷，赋予蛋白质净负电荷。同时与硫醇试剂一起使蛋白质线性化，电泳时蛋白质的分离只与分子大小有关。还原剂：如巯基乙醇或二硫苏糖醇（DTT），用于减少含硫氨基酸（如半胱氨酸）之间产生的二硫键。此外，由于硫醇剂具有抗氧化特性，能够防止半胱氨酸的氧化。与SDS发挥协同作用，使蛋白质线性化。甘油：增加样品的密度，发挥样品沉降作用。 Tris-HCL：维持pH在6.8左右，防止在低温保存的过程中蛋白质肽键断裂，保证了蛋白质的稳定性；同时，Tris可以抑制酶促反应并防止蛋白酶降解蛋白质。溴酚蓝：指示样品在凝胶中的位置。自制蛋白上样缓冲液不仅稳定，而且可以根据实验需求进行调整，确保实验结果的准确性。希望这些配方和步骤对你有所帮助！

WB蛋白上样缓冲液怎么用

WB实验头疼？看这篇！在进行Western Blot实验时，遇到的各种问题可能会让人头疼。以下是一些常见的问题及其解决方法，希望能帮助你顺利完成实验。电泳问题 𐟌Š 电泳电流不均一，玻璃板右下侧有缺口。解决方案：更换新的玻璃板，避免使用两边的两孔。经验之谈：通常使用10孔的胶，如果上样刚好10个孔，最两头的两个孔可能会歪曲。建议上样在胶的中间，这样电场会更均匀。电泳条带问题 𐟎芨𝬨†œ问题，对于分子量稍大的蛋白，转膜时间过长，转膜装置产热过多，无法维持转膜时的低温环境，造成条带扭曲。解决方案：建议在条件允许的情况下直接在4℃中进行转膜，将冰更换为冰水混合物，及时更换转膜液并将转膜液放入4℃中提前预冷。经验之谈：对于大分子量的抗体，跑胶前可以先把样本煮一下，然后稍微离心一下，同样可以改善这种情况。样品问题 𐟧ꊌoading Buffer失效，导致样品变性失败。解决方案：更换Loading Buffer。经验之谈：准备样本时，主要确认上样缓冲液是否为近期配置，并且要妥善保存，否则就会浪费珍贵的实验样本。上样量问题 𐟓 上样量过大或样品杂质多。解决方案：超滤样品或降低上样量。经验之谈：一般电泳过程中恒压电泳，浓缩胶80V，分离胶120V，整个过程差不多需2个小时左右。电压问题 𐟔‹ 电压太高。解决方案：降低电压。经验之谈：准备样本时，主要确认上样缓冲液是否为近期配置，并且要妥善保存，否则就会浪费珍贵的实验样本。希望这些小贴士能帮助你顺利完成Western Blot实验，祝大家实验顺利！

琼脂糖凝胶电泳全攻略：科研必备技巧𐟓š 大家好！今天为大家带来一份详细的琼脂糖凝胶电泳实验指南𐟓–，满满的干货和技巧，赶紧收藏起来吧！ 𐟔 琼脂糖凝胶电泳准备在进行实验前，需要准备好以下物品：琼脂糖凝胶电泳缓冲液上样缓冲液 DNA样品上样针、梳子等工具 𐟔砧𜨄‚糖凝胶电泳的工作原理琼脂糖凝胶电泳是一种基于DNA片段大小进行分离的技术。通过在琼脂糖凝胶中施加电压，DNA片段会根据其大小在凝胶中移动，从而实现分离。 𐟓 琼脂糖凝胶电泳的方法和步骤制作琼脂糖凝胶：将琼脂糖与电泳缓冲液混合，加热溶解后倒入电泳槽中。上样：将DNA样品与上样缓冲液混合，使用上样针将混合物加入凝胶的加样孔中。电泳：打开电源，调整电压和时间，让DNA片段在凝胶中移动。染色与观察：将凝胶放入染色液中进行染色，然后在紫外灯下观察分离的DNA片段。 ⚠️ 注意事项实验过程中要佩戴手套和护目镜，确保安全。电泳时间和电压的调整需要根据DNA片段的大小和浓度进行优化。染色液的使用要适量，避免染色过深或过浅。希望这份指南能帮助大家更好地进行琼脂糖凝胶电泳实验，祝大家实验顺利！𐟎‰

穷人的劳斯莱斯：WB实验指南心𐟉！大家好，今天我想和大家分享一些关于WB（Western Blot）实验的心得，希望对正在做实验的你们有所帮助。虽然这些技巧可能看起来很简单，但它们是我多年实验经验的总结，希望能帮助你们少走弯路。配胶小贴士 𐟧ꊩ斥…ˆ，配胶这一步非常关键。你需要确保凝胶配制时所有的试剂都是新鲜的，特别是过硫酸铵（AP）和TEMED。如果凝胶出现花纹，可能是AP受潮了，检查一下吧。另外，凝胶聚合时间通常在30分钟左右，如果聚合得太慢，可能是AP不新鲜或者环境温度太低。这时，你可以适当增加AP和TEMED的量，但一般不要超过1小时。如果超过1小时还没聚合好，那就要检查你的操作了。处理蛋白样品 𐟥抨›‹白样品的质量直接影响实验结果。如果你发现蛋白提取有问题或者蛋白降解了，那实验肯定做不好。另外，loading buffer也很重要，不要用不新鲜的上样缓冲液。处理样品时，一定要把样品和loading buffer混合均匀。电泳技巧 𐟏Š‍♂️ 跑积层胶时，尽量让样品压齐。如果上样量较大（比如细胞蛋白通常上样在20-30甚至40ul），可以适当减小电压跑20-30分钟，等样品压齐后再开始分离。转膜环节 𐟔„ 转膜的成功与否决定了实验能否顺利进行。电流大小和转膜时间要根据目标蛋白的分子量来定。我个人的经验是：10KDa的蛋白用200mA转1小时，60KDa的蛋白用70V转2小时，90KDa的蛋白用70V转4小时，200KDa的蛋白用70V转6小时。封闭步骤 𐟚ꊥ𐁩—�™一步一般不容易出错，常见的做法是在室温下封闭2-3小时，或者4度封闭过夜。不过要注意，有些抗体需要特殊的封闭液。一抗孵育 𐟦 新抗体使用时，按照说明书推荐的浓度在室温孵育2-3小时。如果抗体效果不好，可以尝试延长孵育时间（比如4度过夜孵育甚至室温过夜孵育），或者增大抗体浓度。如果尝试了所有方法还是不行，建议换抗体。洗膜 𐟌Š 洗膜液洗3遍，每遍10分钟就够了。洗膜时间过长或者次数过多反而不好，膜的背景不好很多时候不是没洗干净，而是抗体浓度过高或者其他原因。二抗孵育 𐟦‹ 选择好一个合适的条件后不要轻易改变。相比一抗，二抗的作用时间要严格控制。实践证明，一抗时间长点可能没关系，但二抗时间过长或过短都会影响结果。希望这些小贴士能帮到你们，祝大家实验顺利！𐟒ꀀ

酶切产物电泳，一文搞定！ 𐟔 实验目的：掌握琼脂糖凝胶电泳的基本原理和方法熟悉琼脂糖凝胶电泳的基本操作步骤掌握琼脂糖凝胶电泳分析酶切产物的方法了解琼脂糖凝胶电泳的应用 𐟔젥ꌥŽŸ理：限制性内切酶工作原理：限制性内切酶是一类核酸内切酶，主要由原核生物基因编码，识别双链DNA的特定序列，即限制位点，并在该序列内部或一侧特定位置切割磷酸二酯键。琼脂糖凝胶电泳原理：琼脂糖凝胶是一种从海藻中提取的天然聚合物，在加热冷却时通过氢键形成胶基质，具有网状结构，有通道孔隙。带电分子在电场中向所带电荷相反的电极移动的现象称为电泳。由于DNA分子在高于其等电点的缓冲液中带负电，因此在电场中通过琼脂糖凝胶的速度与其相对分子质量成反比。 𐟧ꠤ𘻨恨‰‚器材：电泳缓冲液：SXTBELis、EDTA、H18.3 琼脂糖荧光染料：SYBR Green I 上样缓冲液 Marker 电泳仪、水浴电泳槽、制胶板、制胶模具、移液器等 𐟓 实验步骤：制胶前准备配制琼脂糖凝胶加入荧光染料灌胶上样：将酶切DNA产物与上样缓冲液按1:1混合，反复吹打混匀，用微量移液器加入琼脂糖样品槽中，每孔加入10 ，记录样品加入次数及量电泳：安装双电极板，点样孔一端接负极，另一端接正极，打开电源，设置电压60 V，时间4 min。当溴酚蓝移动距离与胶板长度1/2-1/3时，停止电泳观察电泳结果：在紫外灯下观察电泳结果 𐟔堥ꌧ𛓦žœ：酶切产物的琼脂糖凝胶电泳结果 𐟒�ꌨ𜚊哪些因素会影响电泳分析效果？电泳介质pH值：当pH值高于电点时，分子所带的电荷越多，电泳速度越快；反之则泳动速度慢。电泳介质离子强度：影响粒子的电动电位，过高或过低都会引起电泳速度降低。电泳温度：温度高，分子运动加快，有助于提高电泳效果。上样时为什么要加上样缓冲液？确保DNA样品均匀分布，便于观察电泳结果预测DNA样品迁移的速度和最佳位置，及时终止电泳使加样操作更方便 ⚠️ 注意事项：使用移液器时要小心操作，避免损坏琼脂糖凝胶。实验液具有毒性，一定要做好防护，避免接触皮肤。条带模糊可能是出现混样，尽量将药品精确加入槽中。通过以上步骤，你就能掌握琼脂糖凝胶电泳的基本原理和方法，熟悉操作步骤，并能够分析酶切产物。快来试试吧！

RNA电泳攻略，科研新手必看！ RNA的完整性可以通过琼脂糖凝胶电泳来评估。对于科研新手来说，如何进行RNA琼脂糖凝胶电泳是一个常见的问题。虽然网上有很多关于DNA电泳的教程，但RNA和DNA的电泳步骤基本相同。以下是一些详细的步骤和注意事项，帮助你顺利完成实验。 1️⃣ 准备琼脂糖凝胶：首先，你需要准备琼脂糖凝胶。将琼脂糖与适量的缓冲液混合，加热至完全溶解。然后，将溶解后的琼脂糖溶液倒入电泳槽中，待其冷却凝固。 2️⃣ 样品处理：将提取的RNA样品与适量的上样缓冲液混合，确保RNA完全溶解。 3️⃣ 加样：在凝胶的加样孔中加入处理好的RNA样品。 4️⃣ 电泳：打开电源，进行电泳。电泳的时间和电压可以根据具体情况调整，以确保RNA条带清晰。 5️⃣ 染色：电泳结束后，将凝胶进行染色，以便观察RNA条带。常用的染色剂有溴化乙锭（EB）或SYBR Gold。 6️⃣ 观察结果：在紫外灯下观察染色后的凝胶，记录RNA条带的位置和亮度。通过以上步骤，你就可以完成RNA琼脂糖凝胶电泳，评估RNA的完整性。希望这些信息对你有所帮助！

tricine小分子蛋白电泳在进行低分子量蛋白（2.5-40 kD）分离时，Tricine胶（Tricine-SDS-PAGE）是一种常用的电泳方法。雅酶的Tricine配胶试剂盒在以下几个方面具有显著优势： 𐟔„ 简易的配胶过程：雅酶的Tricine配胶试剂盒只需简单混合即可，无需添加TEMED，促凝剂为液体，上层胶为彩色，便于上样。而市面上大多数品牌的配胶组分复杂，需要添加TEMED，促凝剂为固体，需要自行配成液体，且保质期较短。 𐟔砤𞿦𗧚„上样体验：雅酶试剂盒配套赠送蛋白上样缓冲液和考马斯亮蓝快速染液（免脱色），而市面上其他品牌通常需要额外购买这些组件。 𐟔砧𛟤𘀧š„电泳液：雅酶的电泳液不分阴极和阳极，只有一瓶，而其他品牌通常分为两瓶，分别对应阴极和阳极。通过这些特点，雅酶的Tricine配胶试剂盒为用户提供了更加便捷和高效的实验体验。

Superdex分子筛使用和维护指南最近有不少朋友问我关于Superdex分子筛重装的问题。其实，重装只是不得已而为之，平时还是要多注意使用和维护，否则杂质积累会导致压力升高和柱效下降。下面我给大家分享一些使用和维护的小技巧，希望能帮到你们。样品处理 𐟧ꊥœ覠𗥓上分子筛之前，一定要先过一遍0.22um的滤膜，这样可以去除颗粒杂质。如果样品看起来浑浊，最好先离心一下（直接过滤膜可能会堵）。离心后的上清液再过一次0.22um的滤膜。缓冲液 𐟌Š 上样缓冲液如果不放心，可以一并过滤并抽气。缓冲液在低温、高盐浓度或者含有乙醇的情况下，压力会明显上升，这时候需要调低流速或者设置限压，否则可能会出现柱床压塌的情况。定期在线清洗 𐟧𜊥ˆ†子筛柱经过多次使用后，柱内会积累一些杂质，比如蛋白等，时间长了会造成堵塞压力升高，甚至染菌导致柱头位置变色。需要周期性地用NaOH清洗一下（具体频率根据实验和样品情况来定）。在线清洗一般用1M或者0.5M的NaOH清洗1-2个柱体积左右，然后冲出NaOH（避免NaOH残留在柱子里）。厂家说明提到碱处理不理想时可以用乙酸等处理，但我们碰到过有老师经常用酸处理填料的情况，尽量避免经常性使用酸处理。希望这些小技巧能帮到大家，让你们的实验更加顺利！如果有更多问题，欢迎随时交流哦！

琼脂糖 𐟌🠦œ€近在实验室里经常用到一种叫琼脂糖的东西，真心觉得它是个宝藏！𐟒Ž 今天就来和大家聊聊这个神奇的多糖吧！ 𐟧젧𜨄‚糖的基本概念琼脂糖是一种从海藻中提取出来的线性聚合物，主要由D-半乳糖和3,6-脱水半乳糖通过1,4和1,3连接交替形成重复双糖单位。它看起来像一条长链，不带电荷，因此也被称为琼胶素或琼胶糖。琼脂糖的溶点大约在85～90摄氏度，凝固点则在40～42摄氏度。它在高温下容易熔化，但在低温下却能保持稳定。这种特性使得它在凝胶电泳和层析技术中非常有用。 𐟥䠧𜨄‚糖凝胶的制作与应用制作琼脂糖凝胶其实并不难，只需要将适量的琼脂糖粉末加入TAE、TBE或TPE缓冲液中，加热溶解后冷却即可。选择不同浓度的缓冲液会影响凝胶的强度，通常用于分离不同大小的DNA片段。在正式电泳之前，样品通常与上样缓冲液（loading buffer）混合，这样可以帮助样品均匀沉入上样孔中。上样缓冲液中含有溴酚蓝和二甲苯蓝FF，它们在电泳时会按照固定的迁移速度移动，可以作为条带的指示剂。电泳条件可以根据具体实验需求调整，但通常电压保持在4-5V/cm，时间则在30-60分钟之间。电泳结束后，凝胶可以在紫外灯下观察并拍照记录结果。琼脂糖凝胶在DNA回收、细菌转化等方面应用广泛。例如，低熔点的琼脂糖凝胶可以在较低温度下进行DNA回收，这样可以避免高温对DNA的损伤。回收后的DNA可以直接用于细菌转化等后续实验。 𐟔„ 琼脂糖与其他多糖的区别海藻中除了琼脂糖外，还有一种叫琼脂的多糖。两者虽然名字相似，但在组成和用途上却有很大不同。琼脂是一种混合物，包含琼脂糖和琼脂胶。琼脂糖是其中不带电荷的中性组成部分，而琼脂胶则是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖。因此，琼脂在细菌固体培养基的制备中更为常用，而琼脂糖则多用于凝胶电泳和层析技术中。低熔点的琼脂糖凝胶在特定场合中也非常有用。例如，在细菌转化实验中，低熔点的凝胶可以在较低温度下回收DNA，保证DNA的稳定性和完整性。 𐟌𑠨🙤𚛩ƒ𝦘麗‘在实验室里摸索出来的经验和小技巧，希望对大家有所帮助！如果你也有用过这些材料或者有其他问题，欢迎在评论区留言讨论哦！𐟘Š

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