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merip前沿信息_merip-seq全称(2024年12月实时热点)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：教程更新日期：2024-11-29

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m6A MeRIP试剂盒，让RNA甲基化研究更加高效准确！

MeRIP实验详解，一文搞定！探索RNA修饰的奥秘，MeRIP实验是关键。𐟔 这里为你提供MeRIP实验的详细步骤，助你一臂之力！ 1️⃣ 准备RNA：首先，提取总RNA，并分出5-10ul作为Input。 2️⃣ 结合抗体：将40ug RNA与RIP buffer（包含10mM Tris HCl、150mM NaCL和0.1% NP-40）混合，加入1ug抗体/ IgG和RNase Inhibitor（推荐比例为1:500）。在4度摇床中过夜。 3️⃣ 清洗Protein A/G beads：用10倍体积的RIP buffer清洗beads，每次4度、1000rpm、1分钟，重复3次。 4️⃣ 结合RNA-抗体复合物：将步骤1中的混合液体加入到步骤2清洗好的beads中，加入RNase Inhibitor，继续在4度摇床中摇动4小时。 5️⃣ 清洗beads：离心后，用1ml RIP buffer洗去非特异性结合，重复3-5次。 6️⃣ 洗脱RNA：加入500ul Trizol震荡混匀，4度摇床10分钟。然后加入100ul氯仿，冰上放置5分钟，离心后取上层水相。 7️⃣ 沉淀RNA：将上层水相转移至新的RNase free的1.5EP管中，加入2ul糖原和等体积异丙醇，放置于-20度过夜。 8️⃣ 离心沉淀：4度离心，15000g，10分钟。去上清，加入1ml 75%乙醇颠倒混匀。 9️⃣ 再次离心：4度离心，7500g，5分钟。去上清。 𐟔Ÿ 干燥与溶解：室温晾干后，加入适量DEPC水（推荐20ul）溶解。测量浓度，进行后续RT-PCR。 1️⃣1️⃣ RT-PCR：逆转录时，逆转的量与Input相同。 1️⃣2️⃣ 结果分析：计算t=CT RIP-CT Input，表达量=2^(-t)。通过这些步骤，你可以深入探索RNA修饰的奥秘。𐟔Ž𐟓š

RIP和MeRIP实验全攻略：步骤详解 RIP和MeRIP是两种不同的实验方法，各有各的目的。RIP实验的目的是验证蛋白质和RNA的结合情况，而MeRIP则是为了研究特定基因上的修饰。两者的操作步骤也略有不同，但都需要在低温条件下进行，并添加RNase Inhibitor和蛋白酶抑制剂。 RIP实验步骤：准备工作：将细胞放在冰上，加入1ml RIP buffer（含有25 mM Tris, pH 7.4, 150 mM KCl, 0.5 mM DTT, 0.5% NP-40），并加入蛋白酶抑制剂和RNase Inhibitor。在冰上裂解20分钟。收集细胞：将细胞收集到1.5ml的EP管中，4度下15分钟，12000g离心，取上清液到新的EP管中。取适量总蛋白作为Input，用于后续的WB检测。抗体孵育：将剩余的上清液与目的蛋白抗体混合，4度下孵育过夜。清洗Beads：用10倍体积的NT2 buffer（含有50 mM Tris, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM MgCl2, 0.05% NP-40）清洗Protein A/G beads，4度下1000rpm离心1分钟，重复3次。将步骤2中得到的蛋白-抗体复合物加到预清洗好的beads中，并加入RNase Inhibitor。4度下摇床4小时。清洗Beads：用1ml NT2 buffer清洗beads，4度下1000rpm离心1分钟，重复3-5次。最后一次洗beads时，取出适量beads，加2xloading buffer煮沸，进行WB检测。提取RNA：加500ul Trizol震荡混匀，4度下摇床10分钟。加入100ul氯仿，震荡混匀，冰上5分钟。4度下15000g离心15分钟。分离RNA：取上层水相于新的RNase free的1.5EP管中，加入2ul糖原混匀，再加入等体积异丙醇，-20度过夜。4度下15000g离心10分钟，去上清，加入1ml 75%乙醇颠倒混匀。4度下7500g离心5分钟，去上清。室温晾干后，加入20ul DEPC水溶解，测溶度后进行后续qRT-PCR检测。 MeRIP实验步骤：提取总RNA：首先提取细胞中的总RNA。抗体拉RNA：用修饰抗体拉取特定RNA。清洗Beads：用NT2 buffer清洗beads，并进行后续操作。提取RNA：提取beads上的RNA，并进行测序或qRT-PCR验证。这两种实验方法都需要在低温条件下进行，并添加RNase Inhibitor和蛋白酶抑制剂，以确保实验结果的准确性。

IF：14.7007（南开大学）[打call] “BersinBio”RIP、meRIP试剂盒最新在线双十一活动正式开启[鼓掌] 11.4-11.15 预存大增值，科研经费翻倍享受 11.4-11.15 满额赠好礼，平板电脑、蓝牙耳机耳机、咖啡机……买就送[色] 11.11-11.13限时秒杀，热销meRIP等试剂盒、技术服务88折

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